随着现代科技技术的突飞猛进和相关学科的交叉渗透,高效液相色谱法已经在一定程度上解决了传统分离技术的“瓶颈”问题,使其在各个领域中得到广泛应用,是从事分析检验人员解决实际分析问题的有力工具。本文对高效液相色谱在中草药和抗生素中的应用进行分析,对HPLC的发展前景进行综述,供相关人士参考。
【关键词】
高效液相色谱；中草药；抗生素类药物；应用分析
0 前言
中草药种类繁多,除个别使用单味药外,主要是依据中医药理论并按“君臣佐使”配伍组合而成复方药。即使是单方药,其化学成分也常达几十种或更多。复方的成分会更复杂,各成分的理化性质也千差万别,因此中药的分离分析是一项艰巨而细致的工作。抗生素是生物在其生命活动过程中所产生的 能在低微浓度下有选择性地抑制或影响其它生物机能的有机物质,抗生素含量 一般占发酵液的0.1%—5% ,有些更低,因此选用合理有效的分离纯化技术,是成功获取高纯度抗生素的关键 。高效液相色谱的各种公认的优点使得其在中药和抗生素的药品质量分析和质量标准的研究中发挥着重要的作用。并且随着计算机软件相关技术、联用技术等成分分析方法的不断进步,高效液相色谱技术必将成为今后药品检验规范化、国际化的一种重要手段,也必将在药品检验方面作出更大的贡献。
1 高效液相色谱的概述
高效液相色谱法是20世纪60年代末期在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的新型分离分析技术。由于其在分析速度、检测灵敏度、分离效能以及操作自动化方面达到和气相色谱法相媲美的程度,并保持了经典液相色谱对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多等特点；加之它使用的是非破坏性检测器,样品被分析后,在大多数情况下可除去流动相回收样品等优点使得HPLC成为色谱分析中最活跃的分析方法之一。 在各种分析分离过程中,对于结构未知的化合物,需首先进行定性分析,确定化合物的结构,弄清试样是什么,而后进行定量分析确定试样中被测组分的量。高效液相色谱法色谱保留时间和组分结构、性质有直接关系,为定性参数,所以高效液相色谱技术在药物鉴别上具有确定作用。高效液相色谱技术在药品有效成分含量测定上也具有重要作用,使用高效液相色谱技术来测定药物的含量可以有效消除药物中含有的杂质,由于药物制剂中部分附加剂以及共存药物会对含量测定造成干扰,而使用高效液相色谱技术测定药品有效成分含量就可以有效避免其他成分的干扰。但HPLC还只是处于发展初期,经实际应用发现,为更好响应生产需求许多方面仍有待于更深入的研究和完善。例如高效液相色谱法中缺少像气象色谱法中使用的通用型检测器,如热导池检测器、氢火焰离子化检测器；高效液相色谱法中需使用多种溶剂,其成本比气象色谱法高,且易引起环境污染。当进行梯度淋洗时,操作比气象色谱的程序升温操作复杂；高效液相色谱法不能替代气相色谱法去完成要求柱效达10万块理论塔板数以上的、组成复杂的石油样品分析。它也不能替代中、常压柱色谱法去分析受压易分解、变性的生物活性样品。
2 色谱技术方面的进展
2.1固定相
①细胞膜固定相,是将活性细胞膜结合到硅胶载体的表面, 制成细胞膜固定相,利用色谱学技术研究流动相中药物与受体相互作用规律的受体动力学新方法。该法将高效液相色谱、细胞生物学与受体药理学相结合,利用药物与膜受体间存在的特异性亲和力, 成功的将药物在体内的作用过程在色谱柱内进行动态模拟。目前, 细胞膜色谱法已成功应用于中药药效物质基础研究及质量控制、单体化合物活性筛选、药物与受体及受体亚型亲和作用研究等方面。②亲和色谱固定相,采用了分子烙印技术或免疫亲和技术,分子烙印技术是利用具有分子识别能力的聚合物材料---分子烙印聚合物来分离、筛选、纯化目标分子的技术；免疫亲和技术是将抗体固定到固相载体上,利用抗原和抗体间的可逆的结合作用高效选择性分离和纯化目标分子的方法。③金属氧化物固定相 ,近年来许多研究者用氧化铝二氧化锆和二氧化钛等金属氧化物做基质,在其表面上涂渍各聚合物做HPLC的填料,金属氧化物填料既有硅胶填料的机械强度、又具有有机高聚物的化学稳定性,在强酸和强碱介质中稳定性好。因此用氧化物作固定相有其独特的优点。④小颗粒技术固定相,超高效液相色谱、高分离度快速液相色谱和超快速液相色谱分别采用1.7μm、1.8μm、2.2μm颗粒度的色谱柱填料,使用以上三种技术不仅比传统HPLC具有更高的分离能力,而且结束了人们多年来不得不在速度和分离度之间取舍的历史。
2.2检测器
①质谱检测器,使高效液相色谱法建立更加方便,同时具有以下优点：跟踪并鉴别不同色谱图中的每一个峰、从痕量化合物或干扰化合物中找出目标化合物及辨认意外“鬼峰”和重叠干扰峰,以避免建立的方法有误。②新型紫外可见检测器,如UV230检测器采用穿透型氘灯和特制钨灯组成的高密度组合光源,保证了在系统工作波长范围内光能量分布均匀；采用封闭光学体统和光纤传导技术,降低了传统紫外可见检测器光学系统结构的复杂性,减少了光能量的损失,提高了灵敏度,增强了光学系统的稳定性。
3 高效液相色谱的应用
3.1中草药中的应用
Chen等采用粒径1.7μm的小颗粒填料BEHC18色谱柱,用UPLC法对淫羊藿中包括淫羊藿糖苷C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅶ等在内的15种黄酮类成分进行了分析研究。实验采用的梯度洗脱液为乙睛2乙酸水溶液,在15min内将15种黄酮类成分得到了分离,且分离效果满足要求。最低定量限及最低检测限分别为0.52、0.13纳克。
3.2抗生素药类应用
青霉素有效成分的分离可采用反相键合相色谱法,色谱柱为Partisil-10 ODS,流动相：0.25mol/L 硝酸铵水溶液-0.025mol/L EDTA的甲醇溶液,流量1.43ml/min,用UVD检测。用反相色谱柱Sinochrom ODS-BP-C1对放线菌菌株MY02发酵液中的抗真菌活性物质SN06进一步纯化,以甲醇-水系统为流动相,流动相流速为0.4mL/min,柱温30℃,紫外检测波长304nm。8.044min和17.347min两个吸收峰的收集液具有明显的活性,纯度较高,可以满足光谱分析等进一步研究的需要。
4 发展前景
如今化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域不断发展,高效液相色谱法在次过程中的作用不言而喻。人们在优越的生活条件中对物质安全性投射了高度关注,对有毒有害物质十分敏感,使得各个领域的分析分离需求越来越迫切,所以高效液相色谱的发展前景十分乐观。
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【作者简介】
周振霞,女,贵州省铜仁市人,,大学本科学历,成都市双流县西南民族大学,药物分析学方向。
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